冷凍干燥機(jī)在精子表面GPI-APs鑒定的作用，精子表面糖基化磷脂酰肌醇( GPI) -錨定蛋白( APs) 是一類通過(guò)羧基末端的糖基化磷脂酰肌醇錨定在細(xì)胞表面而不跨越膜磷脂雙層的細(xì)胞膜蛋白，而 嗜水氣單胞菌毒素( aerolysin) 是由革蘭氏陰性嗜水性氣單胞菌分泌的外毒素，能與GPI 錨蛋白的 GPI 錨基和 N-glycan 的多糖核心特異性結(jié)合，可以作為生物探針來(lái)鑒定精子表面的GPI錨定蛋白。實(shí)驗(yàn)依次進(jìn)行了嗜水氣單胞菌培養(yǎng)、毒素提取提純、多克隆抗體制備以及三明治蛋白印跡驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。其中菌種凍干上，冷凍干燥機(jī)起到了關(guān)鍵性作用。

毒素制備———菌株復(fù)蘇與擴(kuò)大培養(yǎng)

　　無(wú)菌吸管吸取0.3 ～0.5 mL 營(yíng)養(yǎng)肉湯加入到裝有真空冷凍干燥的菌種安瓿管內(nèi)，凍干菌株溶解呈懸浮狀． 吸取全部菌體懸液，移植于斜面培養(yǎng)基中，30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)36h 后，挑取乳白色菌苔用連續(xù)分區(qū)劃線法接種至培養(yǎng)皿中，繼續(xù)培養(yǎng)24 h． 挑取培養(yǎng)皿中單個(gè)菌落，研磨法接種于盛有5 mL LB 肉湯培養(yǎng)基的50 mL滅菌離心管中，在30℃恒溫振蕩器中( 150 r/ min) 培養(yǎng)12 h 后倒入 250 mL LB 肉湯培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng) 36 h，菌液離心3 000 r/min，15 min，上清回收待用．

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