冷凍干燥機在生物制品大腸桿菌噬菌體的凍干保存
2019-03-07 11:27:05
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冷凍干燥機在生物制品大腸桿菌噬菌體的凍干保存,在4%的濕度條件下完成,包括以下步驟:
1) 大腸桿菌噬菌體溶液于2℃靜置4h,出現(xiàn)絮狀沉淀,經(jīng)過8000r/min離心40min;
2) 向上述沉淀中加入噬菌體緩沖液,將沉淀溶解,得噬菌體液;所述噬菌體緩沖液 以重量組分計,包括以下組分:三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽8份、氯化鈉0.05份、氯化鉀1份、硫 酸鎂5份、磷酸氫二鉀1份、磷酸二氫鈉8份、明膠0.05份和去離子水100份,并且使用稀鹽酸 和/或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH到7;
3) 噬菌體液等體積的噬菌體保存保護(hù)劑混合均勻,所述噬菌體保存保護(hù)劑所述氨 基酸以重量組分計,包括以下組分:5%蔗糖脫脂乳6份、硅藻土 0.3份、木糖醇2份、DEAE-葡 聚糖〇. 8份、阿拉伯膠0.01份、牛血清白蛋白0.7份、麥芽糖糊精0.05份、蜂蜜0.01份、棉子糖 0.8份、磷酸鋁0.03份、氯化鈉0.01份、硫酸鎂0.3份、氯化鈣0.6份、20%甘油1份、阿拉西A0.05份、防腐劑尼泊金乙酯0.01份和去離子水100份;
4) 預(yù)降溫:將上述混合溶液冷凍降溫至5℃,并保持30min;進(jìn)一步以1℃/min的速 度降溫到-5℃,并保持30min;再進(jìn)一步以rC/min的速度降溫到-30℃,并保持lh;
一級干燥:將上述溶液于-30℃、80mTorr壓強的真空條件下干燥12h;二級干燥:以 0. rC/min的速度,加熱上述溶液到25℃,再于上述真空條件下保持4h后得噬菌體凍干粉;
5) 噬菌體凍干粉在無菌條件下密封于安瓿中保存,所述安瓿放入裝有無水氯 化鈣的密封容器中于2℃保存。